Orexin-A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420816
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Orexin-A/B O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Orexin-A/B, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Orexin-A Anticorpo (KK09): sc-80263
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Orexin-A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420816 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Hcrt murino codifica os neuropeptídeos orexina-A e orexina-B (hipocretinas), que são produzidos por uma população restrita de neurônios hipotalâmicos e sinalizam principalmente por meio dos GPCRs OX1R e OX2R. A sinalização por orexina promove o estado de alerta e a manutenção da vigília, integra o balanço energético ao comportamento alimentar e modula respostas de recompensa e estresse por meio do acoplamento à mobilização intracelular de Ca2+, à sinalização via MAPK e a circuitos neuroendócrinos mais amplos. Esses peptídeos influenciam a saída autonômica e as transições sono–vigília ao modular o impulso excitatório em vias monoaminérgicas e colinérgicas. A desregulação da função das orexinas está fortemente ligada à instabilidade do ciclo sono–vigília e a fenótipos metabólicos, tornando o Hcrt um nó-chave para estudos mecanísticos do controle de estados neurais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Orexin-A/B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Hcrt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Hcrt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Hcrt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Orexin-A/B.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Hcrt para a investigação da sinalização de Orexin-A/B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Hcrt críticos para a função Orexin-A/B
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Hcrt para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Orexin-A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Orexin-A/B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Hcrt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Orexin-A/B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Orexin-A/B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Hcrt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Hcrt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.