Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420816

概要

マウスHcrtは、オレキシンAおよびオレキシンB（ヒポクレチン）という神経ペプチドをコードしており、これらは視床下部の限局した神経細胞集団で産生され、主としてGPCRであるOX1RおよびOX2Rを介してシグナルを伝達します。オレキシンシグナルは、覚醒の促進と覚醒維持、エネルギーバランスと摂食行動の統合、さらに細胞内Ca2+動員やMAPKシグナル、およびより広範な神経内分泌回路との連関を通じて報酬・ストレス応答を調節します。これらのペプチドは、モノアミン作動性およびコリン作動性経路にまたがる興奮性入力を形作ることで、自律神経出力や睡眠—覚醒の移行に影響を及ぼします。オレキシン機能の破綻は睡眠—覚醒の不安定性や代謝表現型と強く関連しており、Hcrtは神経状態制御の機構研究における重要な結節点となっています。

Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHcrt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hcrt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hcrtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Orexin-A/Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Orexin-A/Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hcrt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Orexin-A/Bの機能に不可欠なHcrtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hcrtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOrexin-A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hcrt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Orexin-A/B HDRプラスミド（m）および Orexin-A/B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHcrtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHcrt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。