OPN1MW Double Nickase Plasmid (h): sc-416637-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das OPN1MW Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- OPN1MW Double-Nickase-Plasmid (h) und OPN1MW Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf OPN1MW abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
OPN1MW Double Nickase Plasmid (h) | sc-416637-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1MW Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416637-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1MW kodiert das mittelwellenlängenempfindliche Opsin (M-Opsin), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Zapfen-Photorezeptoren, der 11‑cis‑Retinal bindet und als Antwort auf grünes Licht die Phototransduktion auslöst. Nach Aktivierung koppelt es an die Signaltransduktionskaskade aus Zapfen-Transducin (GNAT2) und PDE6, senkt den cGMP-Spiegel und reguliert die Aktivität cGMP-gesteuerter Ionenkanäle, um Membranpotenzial und synaptische Ausgabe in retinalen Zapfen zu steuern. Eine korrekte Expression und Lokalisation von OPN1MW unterstützt die Struktur des Zapfenaußensegments und die Farbdiskrimination und ist damit mit zentralen Prozessen der visuellen Signalübertragung und der Netzhautphysiologie verknüpft. Genetische Variation oder Fehlregulation von OPN1MW wird mit erblichen Farbsehstörungen und verwandten Zapfenfunktions-Phänotypen in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Studien zur Netzhautentwicklung, zum Opsin-Transport (Trafficking) und zur Integrität des Phototransduktionsnetzwerks.
OPN1MW Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OPN1MW-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OPN1MW abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OPN1MW-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OPN1MW-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.