OPN1MW Double Nickaseプラスミド (h): sc-416637-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- OPN1MW Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- OPN1MWダブルニカースプラスミド（h）およびOPN1MWダブルニカースプラスミド（h2）は、OPN1MWを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
OPN1MW Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416637-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1MW Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416637-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1MWは、中波長感受性オプシン（Mオプシン）をコードしており、11-cis-レチナールに結合して緑色光に応答し、光情報伝達（フォトトランスダクション）を開始する錐体視細胞のGタンパク質共役受容体です。活性化されると、錐体トランスデューシン（GNAT2）–PDE6のシグナル伝達カスケードを作動させ、cGMPを低下させることで、cGMP依存性イオンチャネルの活性を調節し、網膜錐体における膜電位とシナプス出力を制御します。OPN1MWの適切な発現と局在は、錐体外節の構造維持と色識別を支え、視覚シグナル伝達および網膜生理の中核的過程に関与します。OPN1MWの遺伝的変異や発現調節異常は、遺伝性の色覚異常や関連する錐体機能表現型と関連しており、網膜発生、オプシン輸送、ならびに光情報伝達ネットワークの健全性を研究する上で重要な対象となります。
OPN1MW ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における OPN1MW 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、OPN1MW内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、OPN1MWの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、OPN1MWが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。