OPG/OsteoprotegerinCRISPR激活质粒(h): sc-400497-ACT

TNFRSF11B 编码骨保护素（osteoprotegerin，OPG）。OPG 是 TNF 受体超家族中的一种可分泌“诱饵”受体，能够结合 RANKL（TNFSF11）并限制 RANK–RANKL 信号传导，从而调控破骨细胞分化与骨重建。通过“截留”RANKL 及相关配体，OPG 影响破骨细胞前体中下游 NF-κB 与 MAPK 通路的激活，并促进成骨细胞与破骨细胞活动之间的耦联。除骨骼生物学之外，OPG 还被认为通过调节细胞因子信号以及细胞外微环境线索参与血管与免疫相关过程。TNFRSF11B/OPG 表达失衡与骨转换表型异常相关，并在骨质疏松、溶骨性疾病机制以及与钙化相关的病理生物学等背景中受到研究。

OPG/Osteoprotegerin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TNFRSF11B的表达。

OPG/Osteoprotegerin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TNFRSF11B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TNFRSF11B转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性OPG/Osteoprotegerin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TNFRSF11B位点，并能够研究内源性位点上依赖于OPG/Osteoprotegerin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TNFRSF11B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OPG/Osteoprotegerin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。