OLFML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404425

Übersicht

OLFML3 (olfactomedin-like 3) kodiert ein sezerniertes, extrazellulärmatrix-assoziiertes Glykoprotein der Olfactomedin-Familie, das an Zell–Matrix-Interaktionen und am Gewebeumbau beteiligt ist. Es wird in stromalen und vaskulären Kontexten exprimiert und mit der Regulation angiogener Programme, fibroblastenähnlichen Verhaltensweisen sowie der Modulation inflammatorischer Mikroumgebungen in Verbindung gebracht, unter anderem über Effekte auf extrazelluläre Signalcues. Die OLFML3-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Organisation der Extrazellulärmatrix, die Zellmigration und das endothel–stromale Crosstalk steuern – Prozesse, die während der Tumorprogression und fibrotischer Umbauvorgänge häufig verändert sind. Eine dysregulierte OLFML3-Expression wurde in mehreren Krebsarten und vaskulär assoziierten Pathologien beschrieben, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für die Untersuchung mikroumgebungsgetriebener Phänotypen unterstreicht.

Das OLFML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des OLFML3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des OLFML3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von OLFML3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OLFML3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von OLFML3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OLFML3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf OLFML3-Exone abzielen, die für die OLFML3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere OLFML3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OLFML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom OLFML3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des OLFML3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OLFML3 HDR-Plasmid (h) und OLFML3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von OLFML3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten OLFML3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.