Particules Lentivirales d'Activation (h) OIP5: sc-409486-LAC

OIP5 (Opa-interacting protein 5, également connue sous le nom de Mis18β) est un facteur conservé, régulé au cours du cycle cellulaire, qui soutient l’identité du centromère et la ségrégation fidèle des chromosomes. Elle participe à l’assemblage du centromère/kinétochore en contribuant au chargement et au maintien de CENP-A, reliant ainsi la fonction d’OIP5 à la progression mitotique et à la stabilité du génome. Une expression dérégulée d’OIP5 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est souvent associée à des signatures prolifératives, soulignant sa pertinence pour l’étude de l’instabilité chromosomique, de l’aneuploïdie et du contrôle de la division cellulaire. Par conséquent, OIP5 est fréquemment étudiée dans des voies gouvernant la mitose, les réponses au stress de réplication de l’ADN et les programmes d’état cellulaire prolifératif.

Les particules d'activation lentivirales OIP5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de OIP5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales OIP5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription OIP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de OIP5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif OIP5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.