Plasmide CRISPR/Cas9 KO OCTN1 (h): sc-403258

Présentation

SLC22A4 code le transporteur humain de cations organiques/carnitine OCTN1 (famille SLC22), une protéine membranaire à passages multiples qui assure l’entrée et l’efflux de zwitterions et de cations organiques, notamment des substrats liés à la carnitine ainsi que l’antioxydant ergothionéine. En régulant la disponibilité intracellulaire de ces métabolites, OCTN1 contribue à l’homéostasie rédox cellulaire, à la prise en charge des xénobiotiques et aux réponses au stress métabolique, avec un impact fonctionnel dans les tissus épithéliaux, immunitaires et associés aux barrières. Les variations génétiques et l’expression altérée de SLC22A4 ont été associées à la susceptibilité et à la modulation phénotypique dans des troubles inflammatoires et immuno-associés, ce qui en fait un élément pertinent pour étudier la signalisation liée au transport et les interactions avec l’environnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OCTN1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC22A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC22A4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC22A4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OCTN1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC22A4 pour l'étude de la signalisation de OCTN1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC22A4 essentiels à la fonction de OCTN1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC22A4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OCTN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OCTN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC22A4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OCTN1 plasmide HDR (h) et le OCTN1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC22A4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC22A4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.