OCT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402232-ACT

SLC22A1は有機カチオントランスポーター1（OCT1）をコードしており、血漿膜を介して、内因性アミンや多様な外来性の有機カチオンをナトリウム非依存的に取り込む多基質性の溶質キャリアです。OCT1の活性は、荷電した代謝産物や薬物の細胞内動態を規定し、循環中化合物の肝臓での取り扱いに影響するとともに、輸送体依存的な薬物動態（薬物動態学的特性）の個人差にも寄与します。カチオン性基質の細胞内利用可能性を制御することで、OCT1は解毒や代謝恒常性の経路と結びつき、酸化ストレスやミトコンドリア機能を調節する過程を含むさまざまなプロセスに関与します。SLC22A1の発現変化や遺伝子多型は薬物応答の差と関連することが報告されており、輸送体介在性取り込みを規定する因子として、肝関連疾患やがん生物学の領域でも検討されています。

OCT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC22A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OCT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC22A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC22A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OCT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC22A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOCT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC22A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOCT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。