OAS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404302-ACT

ヒトOAS2（2′-5′-オリゴアデニル酸合成酵素2）はインターフェロン刺激によって誘導される酵素で、ウイルス由来の二本鎖RNAを検知し、2′-5′結合のオリゴアデニル酸を合成します。これらはRNase Lを活性化し、ウイルスRNAおよび細胞RNAの分解を促進します。このOAS2–RNase L軸は自然免疫による抗ウイルス防御の中核を成し、下流の炎症反応やストレス応答プログラムを形成するとともに、I型インターフェロンシグナル伝達やパターン認識受容体（PRR）経路とも交差します。OAS2の活性や発現シグネチャの変化は、ウイルス感受性、慢性炎症、自己免疫様表現型に関与するインターフェロン応答の制御不全と関連づけられてきました。そのためOAS2は、宿主–病原体相互作用、サイトカイン駆動性の転写ネットワーク、ならびにRNA分解に依存した免疫シグナル制御の研究で頻繁に解析されています。

OAS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OAS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OAS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OAS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOAS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OAS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOAS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOAS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOAS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOAS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。