Nup155 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405347-ACT

NUP155 codifica Nup155, un componente centrale del complesso del poro nucleare che contribuisce all’integrità dell’involucro nucleare e al trasporto selettivo di proteine e RNA tra nucleo e citoplasma. Nup155 partecipa al traffico nucleocitoplasmatico, all’assemblaggio dell’NPC e al rimodellamento dell’involucro nucleare legato al ciclo cellulare, processi che influenzano la regolazione genica e l’omeostasi cellulare. L’alterazione della funzione dei pori nucleari può perturbare la maturazione dell’RNA e le reti di segnalazione che dipendono da un’importazione/esportazione nucleare regolata; inoltre NUP155 è stato associato a contesti patologici umani legati a difetti del trasporto nucleare, inclusi fenotipi di conduzione cardiaca e, più in generale, patobiologia associata all’involucro nucleare. Queste caratteristiche rendono NUP155 un bersaglio utile per studiare come l’architettura dell’NPC modelli i programmi trascrizionali e le risposte allo stress.

Nup155 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP155 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup155 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP155 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP155, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup155. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP155 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup155 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup155 nelle cellule tumorali con espressione di NUP155 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.