NRSF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418578-ACT

O fator de transcrição silenciador RE1 (REST), também conhecido como fator silenciador restritivo neuronal (NRSF), é um repressor transcricional do tipo “zinc-finger” que se liga a elementos RE1/NRSE para regular grandes redes gênicas que controlam a diferenciação neuronal, a função sináptica e a transcrição dependente de atividade. Ao recrutar complexos correpressores como CoREST, HDACs e enzimas modificadoras de cromatina, o REST molda estados epigenéticos e modula programas de processamento de RNA em contextos neurais e não neurais. A regulação dependente de REST interage com o remodelamento de cromatina, a expressão de canais iônicos e vias de resposta ao estresse que influenciam decisões de destino celular e excitabilidade. A atividade desregulada de REST/NRSF tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, bem como na biologia tumoral, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar a repressão transcricional e os circuitos gênicos neuronais em células humanas.

NRSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de REST sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NRSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus REST em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição REST, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NRSF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus REST nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NRSF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NRSF em células tumorais com expressão de REST silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.