NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402423

概要

SLC11A1はNRAMP1をコードしており、NRAMP1はプロトン共輸送型の二価金属トランスポーターです。主として骨髄系細胞のエンドソーム／ファゴソーム膜に局在し、Fe²⁺やMn²⁺の輸送フラックスを調節することで、病原体を含む区画内の金属利用可能性を形成します。小胞内の金属組成を制御することにより、NRAMP1は抗菌エフェクター機構、レドックス恒常性、炎症経路や抗原処理と交差する自然免疫シグナル伝達に影響します。SLC11A1の遺伝的多型や発現変化は、細胞内感染に対する感受性の違いや炎症表現型の調節と関連づけられており、宿主—病原体相互作用および免疫制御の研究に有用な遺伝子座です。ヒト細胞モデルでは、NRAMP1の機能はしばしばマクロファージ活性化、ファゴソーム成熟、そして微生物の持続に影響する栄養制限機構の文脈で検討されます。

NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC11A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC11A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC11A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NRAMP 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NRAMP 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC11A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NRAMP 1の機能に不可欠なSLC11A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC11A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNRAMP 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC11A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NRAMP 1 HDRプラスミド（h）および NRAMP 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC11A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC11A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。