NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402423

Übersicht

SLC11A1 kodiert NRAMP1, einen protonengekoppelten Transporter für zweiwertige Metalle, der vor allem mit endosomalen und phagosomalen Membranen in myeloiden Zellen assoziiert ist. Dort reguliert er den Fluss von Fe²⁺ und Mn²⁺ und prägt die Metallverfügbarkeit in pathogenhaltigen Kompartimenten. Durch die Kontrolle der intravesikulären Metallzusammensetzung beeinflusst NRAMP1 antimikrobielle Effektormechanismen, das Redoxgleichgewicht sowie die angeborene Immun-Signalgebung, die mit Entzündungswegen und der Antigenverarbeitung zusammenwirkt. Genetische Variation oder veränderte Expression von SLC11A1 wurde mit Unterschieden in der Anfälligkeit für intrazelluläre Infektionen und der Modulation entzündlicher Phänotypen in Verbindung gebracht, was diesen Genort für Studien zur Wirt–Pathogen-Interaktion und Immunregulation nützlich macht. In humanen Zellmodellen wird die Funktion von NRAMP1 häufig im Kontext der Makrophagenaktivierung, der Phagosomenreifung und von Nährstofflimitierungsmechanismen untersucht, die die mikrobielle Persistenz beeinflussen.

Das NRAMP 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC11A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC11A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC11A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NRAMP 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC11A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NRAMP 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC11A1-Exone abzielen, die für die NRAMP 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC11A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NRAMP 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NRAMP 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC11A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NRAMP 1 HDR-Plasmid (h) und NRAMP 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC11A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC11A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.