NR5A2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402656-NIC

NR5A2 (membro 2 do grupo A da subfamília 5 de receptores nucleares; LRH-1) é um fator de transcrição de receptor nuclear órfão que se liga a elementos de resposta hormonal para regular programas gênicos que controlam a homeostase do colesterol e dos ácidos biliares, a esteroidogênese e o metabolismo lipídico. Em contextos epiteliais, o NR5A2 também sustenta estados proliferativos e de diferenciação ao integrar sinais da sinalização por receptores nucleares com redes transcricionais metabólicas e do desenvolvimento. Sua atividade se cruza com vias que regem a função pancreática e hepática, e alterações na expressão do NR5A2 ou variantes regulatórias têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças, incluindo inflamação e reprogramação transcricional associada ao câncer. Como regulador associado à linhagem e ao metabolismo, o NR5A2 é frequentemente estudado em modelos de biologia gastrointestinal, hepática e pancreática, bem como em análises de circuitos transcricionais.

NR5A2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NR5A2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NR5A2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NR5A2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NR5A2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.