NPY5-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421954

Übersicht

Npy5r kodiert den Neuropeptid‑Y‑Rezeptor Y5 (NPY5‑R), einen über Gi/o gekoppelten GPCR, der Neuropeptid Y und verwandte Peptide bindet, um intrazelluläre cAMP‑Spiegel und nachgeschaltete Kinase‑Signalwege zu modulieren. Im zentralen Nervensystem trägt NPY5‑R über die Integration hypothalamischer und limbischer Schaltkreise zur Regulation von Nahrungsaufnahme, Energiehomöostase, Stressreaktivität und neuroendokrinen Ausgängen bei. Die Rezeptoraktivierung beeinflusst synaptische Transmission, neuronale Erregbarkeit und die Plastizität neuropeptiderger Netzwerke und verknüpft Npy5r damit mit Signalwegen, die Appetit und metabolische Regulation steuern. Eine Fehlregulation der NPY‑Signalübertragung wird mit Adipositas‑assoziierten Phänotypen sowie affektiv‑stressbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch Npy5r ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen darstellt.

Das NPY5-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Npy5r-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Npy5r-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Npy5r nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPY5-R-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Npy5r-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPY5-R-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Npy5r-Exone abzielen, die für die NPY5-R-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Npy5r-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NPY5-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NPY5-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Npy5r-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPY5-R HDR-Plasmid (m) und NPY5-R HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Npy5r-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Npy5r-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.