Npl4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403787-ACT

ヒトのNPLOC4は、p97/VCP ATPaseの主要な補助因子であるNpl4をコードしており、UFD1と協調してユビキチン化基質を認識・抽出し、プロテアソームによる処理へと導きます。Npl4はユビキチン結合ドメインを介して、小胞体関連分解（ERAD）、停滞したリボソームに結合した新生ポリペプチド鎖の除去、さらに細胞周期の進行やストレス適応シグナルに影響するより広範なプロテオスタシス制御の調整に寄与します。これらの経路は、重要なシグナル伝達因子やクロマチン関連タンパク質のターンオーバーを制御することにより、DNA損傷応答や炎症性転写プログラムとも交差します。VCP–UFD1–NPL4軸の機能破綻は、プロテオトキシックストレス、タンパク質恒常性の変化、増殖状態における脆弱性と関連しており、NPLOC4は神経変性およびがん生物学の機序研究において重要な標的となります。

Npl4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NPLOC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Npl4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NPLOC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNPLOC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Npl4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNPLOC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNpl4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNPLOC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNpl4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。