Nox4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-424443-ACT-2

O gene Nox4 (NADPH oxidase 4) de camundongo codifica uma enzima constitutivamente ativa geradora de espécies reativas de oxigênio (ERO), que produz principalmente peróxido de hidrogênio, moldando a sinalização redox em múltiplos tipos celulares. As ERO derivadas de NOX4 modulam vias como TGF-β/SMAD, MAPK, PI3K–AKT e NF-κB, influenciando processos como diferenciação, remodelamento da matriz extracelular, apoptose e respostas ao estresse, com papéis de destaque na biologia vascular, na função renal e na ativação de fibroblastos. A atividade desregulada de Nox4 tem sido associada a fenótipos experimentais relevantes para fibrose, hipertensão e remodelamento vascular, disfunção metabólica e lesão tecidual inflamatória em modelos murinos. A edição gênica de Nox4 permite a dissecação mecanística da sinalização de ERO compartimentalizada, a investigação de programas transcricionais dependentes de redox e a validação das contribuições de NOX4 em sistemas celulares e in vivo relevantes para doenças.

Nox4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nox4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nox4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nox4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nox4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nox4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nox4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nox4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nox4 em células tumorais com expressão de Nox4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.