NMDAε2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400654-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NMDAε2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h) e il NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRIN2B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NMDAε2 Antibody (A-8): sc-365597
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NMDAε2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAε2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2B codifica la subunità NMDAε2 (GluN2B) dei recettori N-metil-D-aspartato, canali ionici regolati da ligando che controllano l’ingresso di Ca²⁺ durante la neurotrasmissione eccitatoria. I recettori contenenti NMDAε2 modulano la plasticità sinaptica, l’apprendimento e la memoria collegando l’attività neuronale a vie di segnalazione a valle come la trascrizione dipendente da CaMKII/CREB, la segnalazione MAPK/ERK e il rimodellamento del citoscheletro dipendente dall’attività. La funzione di GRIN2B è strettamente legata allo sviluppo delle sinapsi glutamatergiche e alle risposte allo stress eccitotossico, integrando segnali che influenzano la maturazione delle spine dendritiche e il perfezionamento dei circuiti neurali. Varianti genetiche e deregolazione di GRIN2B sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla segnalazione sinaptica e sulla funzione delle reti neuronali.
NMDAε2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRIN2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRIN2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRIN2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRIN2B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.