Nkx-2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421901

Visão geral

Nkx2-2 codifica o fator de transcrição homeobox Nkx-2.2, um regulador nuclear essencial para a padronização embrionária e a especificação de linhagens no sistema nervoso central em desenvolvimento e em tecidos derivados do endoderma. No tubo neural ventral, Nkx-2.2 atua a jusante da sinalização de Sonic hedgehog para estabelecer domínios de progenitores e impulsionar programas de diferenciação, coordenando redes regulatórias de genes que moldam a identidade de subtipos neuronais. No pâncreas, Nkx-2.2 contribui para o desenvolvimento e a maturação de células endócrinas ao controlar programas transcricionais ligados à determinação de linhagens das ilhotas e à expressão hormonal. A desregulação de circuitos transcricionais dependentes de NKX2-2 tem sido associada a trajetórias neurodesenvolvimentais alteradas e a perturbações na diferenciação endócrina, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de biologia do desenvolvimento e de modelagem de doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nkx2-2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nkx2-2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nkx2-2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Nkx-2.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nkx2-2 para a investigação da sinalização de Nkx-2.2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nkx2-2 críticos para a função Nkx-2.2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nkx2-2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Nkx-2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Nkx-2.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nkx2-2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Nkx-2.2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Nkx-2.2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nkx2-2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nkx2-2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.