Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401641-ACT

CHRNB2 codifica la subunità β2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), canali cationici attivati da ligando che si assemblano con subunità α per regolare l’eccitabilità di membrana e la segnalazione dipendente dal calcio. Gli nAChR contenenti β2 collegano la neurotrasmissione colinergica a vie a valle che influenzano la plasticità sinaptica, il rilascio di neurotrasmettitori e la modulazione dei circuiti a livello del sistema nervoso centrale. Alterazioni dell’espressione di CHRNB2 o della composizione recettoriale sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neurosviluppativi, inclusi la dipendenza da nicotina e la suscettibilità alle crisi epilettiche, a riflettere il suo ruolo nell’equilibrio eccitatorio/inibitorio. In quanto subunità di un recettore di membrana, CHRNB2 è inoltre rilevante per studi sull’assemblaggio del recettore, sul traffico intracellulare e sulla sensibilità farmacologica all’interno delle reti di segnalazione colinergica.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.