Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401702-ACT

CHRNA5 codifica a subunidade alfa 5 do receptor nicotínico de acetilcolina, um componente acessório de canais catiônicos heteroméricos controlados por ligante que modula a montagem do receptor, a condutância iônica e a cinética de dessensibilização em resposta à acetilcolina e à nicotina. Ao moldar a sinalização colinérgica, o CHRNA5 influencia a despolarização de membrana, a sinalização dependente de cálcio e vias posteriores relacionadas à excitabilidade neuronal e à plasticidade sináptica. Variações genéticas e alterações na expressão de CHRNA5 têm sido associadas à suscetibilidade à dependência de nicotina e a características relacionadas ao tabagismo, e vêm sendo investigadas no contexto da biologia do epitélio pulmonar e de fenótipos neuropsiquiátricos. Como subunidade regulatória, o CHRNA5 pode ajustar as respostas do receptor de maneira específica ao tipo celular, o que o torna relevante para estudos mecanísticos de circuitos colinérgicos e de programas transcricionais dependentes de estímulos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 em células tumorais com expressão de CHRNA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.