Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402254
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NF-L O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NF-L, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NF-L Anticorpo (8A1): sc-20012
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402254 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
NEFL codifica a cadeia leve do neurofilamento (NF-L), uma proteína central de filamento intermediário que se monta em conjunto com NEFM e NEFH para formar o citoesqueleto neuronal e manter o calibre axonal e a estabilidade mecânica. A NF-L participa do transporte e da organização dos neurofilamentos, influenciando o tráfego axonal, a dinâmica do citoesqueleto e a conectividade neuronal de longo alcance. A disfunção de NEFL perturba a montagem dos neurofilamentos e a integridade do axónio, ligando vias de stress do citoesqueleto a uma disfunção neuronal progressiva. Variantes e alterações na homeostase de NF-L estão associadas a neuropatias hereditárias e a processos neurodegenerativos nos quais a estrutura e o transporte axonais ficam comprometidos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NF-L (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NEFL em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NEFL, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NEFL na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NF-L.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NEFL para a investigação da sinalização de NF-L, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NEFL críticos para a função NF-L
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NEFL para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NEFL. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NF-L Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NF-L (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NEFL para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NEFL definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.