Neutrophil Elastase Double Nickaseプラスミド (h): sc-400677-NIC

ELANE は、好中球エラスターゼをコードしている。好中球エラスターゼはアズール顆粒に貯蔵されるセリンプロテアーゼで、脱顆粒や好中球細胞外トラップ（NET）形成の際に放出され、細胞外マトリックスを再構築するとともに微生物タンパク質を分解する。好中球エラスターゼ活性は、自然免疫シグナル伝達、プロテアーゼ／抗プロテアーゼのバランス、炎症性プロテオリシスと交差し、走化性、サイトカインのプロセシング、組織傷害応答に影響を与える。ELANE の機能または発現の破綻は、好中球主導の炎症性病態や宿主防御の低下と関連し、ELANE のバリアントは先天性好中球減少症の表現型と関連する。そのため ELANE は、骨髄系分化、顆粒の生合成、および好中球活性化がタンパク質分解的な微小環境と結び付く機構の研究において広く検討されている。

Neutrophil Elastase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ELANE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ELANE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ELANEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ELANEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。