Neurogenin 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403619-ACT

NEUROG3 (Neurogenin 3) é um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básico (bHLH) que atua como regulador mestre da especificação da linhagem endócrina, particularmente durante o desenvolvimento pancreático, no qual promove o comprometimento e a diferenciação de progenitores endócrinos. Ao se ligar a motivos E-box e coordenar redes transcricionais com vias como a inibição lateral mediada por Notch, o NEUROG3 ajuda a controlar o equilíbrio entre a manutenção de progenitores e as decisões de destino endócrino. Sua atividade influencia o surgimento de programas celulares produtores de insulina, glucagon e somatostatina, tornando-o central para estudos da formação das ilhotas pancreáticas e da identidade de células endócrinas. Alterações na função ou na expressão de NEUROG3 estão associadas a distúrbios congênitos do desenvolvimento enteroendócrino e endócrino pancreático e são frequentemente investigadas em modelos de insuficiência de células β relacionada ao diabetes e de disfunção endócrina gastrointestinal.

Neurogenin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEUROG3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurogenin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEUROG3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEUROG3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurogenin 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEUROG3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurogenin 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurogenin 3 em células tumorais com expressão de NEUROG3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.