Net Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420157
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Net O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Net, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Net Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420157 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Elk3 codifica o fator de transcrição Net, da família ETS, um regulador dependente do contexto que integra a sinalização MAPK/ERK com complexos do fator de resposta ao soro (SRF) para modular programas de genes de resposta imediata. Net liga-se a motivos ETS em promotores e potenciadores (enhancers) e pode atuar como represssor ou ativador transcricional, dependendo do estado de fosforilação e da disponibilidade de cofatores, moldando transições de estado celular associadas à proliferação, migração e diferenciação. Em sistemas murinos, a atividade de Elk3/Net é frequentemente estudada na biologia vascular e estromal, onde o circuito ETS–SRF influencia a expressão de genes angiogênicos e a remodelação tecidual. A desregulação de redes transcricionais ETS está implicada em sinalização oncogênica, fenótipos invasivos e respostas vasculares aberrantes, tornando Elk3 um nó útil para a investigação mecanística de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Net (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Elk3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Elk3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Elk3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Net.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Elk3 para a investigação da sinalização de Net, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Elk3 críticos para a função Net
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Elk3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Net Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Net Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Elk3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Net Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Net (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Elk3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Elk3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.