Net CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420157

Übersicht

Elk3 kodiert den ETS-Familien-Transkriptionsfaktor Net, einen kontextabhängigen Regulator, der die MAPK/ERK-Signalübertragung mit Serum-Response-Factor-(SRF)-Komplexen integriert, um Programme der Immediate-Early-Gene zu modulieren. Net bindet an ETS-Motive in Promotoren und Enhancern und kann – abhängig vom Phosphorylierungsstatus und der Verfügbarkeit von Kofaktoren – als transkriptioneller Repressor oder Aktivator wirken. Dadurch beeinflusst es Zellzustandsübergänge, die mit Proliferation, Migration und Differenzierung verknüpft sind. In Mausmodellen wird die Aktivität von Elk3/Net häufig in der Gefäß- und Stromabiologie untersucht, wo ETS–SRF-Schaltkreise die Expression angiogener Gene und den Gewebeumbau steuern. Eine Fehlregulation von ETS-Transkriptionsnetzwerken wird mit onkogenen Signalwegen, invasiven Phänotypen und aberranten Gefäßreaktionen in Verbindung gebracht, weshalb Elk3 ein geeigneter Knotenpunkt für mechanistische Analysen von Signalwegen ist.

Das Net CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Elk3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Elk3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Elk3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Net-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Elk3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Net-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Elk3-Exone abzielen, die für die Net-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Elk3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Net CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Net CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Elk3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Net HDR-Plasmid (m) und Net HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Elk3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Elk3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.