NELF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405667

概要

NELFB は、RNA ポリメラーゼ II のプロモーター近傍でのポージングを制御し、生産的な転写伸長を協調させる負の伸長因子（NELF）複合体の中核サブユニットである NELF-B をコードします。NELF-B は DSIF と協調してこのチェックポイントを介し、刺激に迅速に応答する遺伝子発現プログラム、転写共役的な RNA プロセシング、およびクロマチンに連動した転写速度（キネティクス）の制御に影響を与えます。NELF-B 依存的なポージングは、転写出力や細胞状態の遷移を微調整するシグナル伝達・ストレス応答経路とも統合されています。伸長制御やポージング関連ネットワークの破綻は、がん化に関わる転写プログラムをはじめ、遺伝子制御の異常を特徴とするさまざまな疾患に関与するとされており、NELFB は転写制御機構の解明に有用な研究ノードとなります。

NELF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNELFB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NELFB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NELFBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NELF-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NELF-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NELFB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NELF-Bの機能に不可欠なNELFBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NELFBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NELF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNELF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NELFB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NELF-B HDRプラスミド（h）および NELF-B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNELFBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNELFB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。