NEDD4 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421848-LAC

Das murine Gen **Nedd4** kodiert **NEDD4**, eine E3-Ubiquitin-Ligase mit HECT-Domäne, die den Proteinumsatz und die Signalübertragung reguliert, indem sie den Transfer von Ubiquitin auf Membranrezeptoren, Ionenkanäle und Signalintermediate katalysiert. Über die WW-Domänen-vermittelte Erkennung von PY-Motiv-Substraten beeinflusst NEDD4 die Endozytose und das Trafficking von Oberflächenproteinen und moduliert Signalwege wie **PI3K–AKT**, **TGF-β** und **EGFR-assoziierte** Signalübertragung, mit nachgeschalteten Effekten auf Zellwachstum, Überleben und Migration. Die NEDD4-Aktivität greift zudem in Netzwerke der Proteostase und der Stressantwort ein und prägt die ubiquitinabhängige Umgestaltung zellulärer Signalkomplexe. Eine Fehlregulation der NEDD4-abhängigen Ubiquitinierung wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderter epithelialer Transport, abnorme proliferative Signalgebung sowie Immun- und neuronale Dysfunktionen, was NEDD4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.

NEDD4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nedd4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NEDD4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nedd4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NEDD4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nedd4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.