NDUFV2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403777-ACT

NDUFV2 codifica uma subunidade central do complexo I mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidoredutase) na membrana interna da mitocôndria, onde contribui para a transferência de eletrões do NADH para a cadeia respiratória. Por meio do seu papel na fosforilação oxidativa, o NDUFV2 sustenta a produção de ATP, o equilíbrio redox mitocondrial e a regulação de espécies reativas de oxigénio que influenciam a sinalização de stress e a adaptação metabólica. A perturbação de componentes do complexo I, incluindo o NDUFV2, está associada a fenótipos de disfunção mitocondrial e a estados bioenergéticos alterados relevantes para a neurodegeneração, o stress cardiometabólico e outras perturbações ligadas ao comprometimento do transporte de eletrões. Como resultado, o NDUFV2 é amplamente utilizado como ponto de entrada molecular para estudar a respiração mitocondrial, o metabolismo do NADH e a sinalização celular mediada pela mitocôndria.

NDUFV2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDUFV2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDUFV2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDUFV2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDUFV2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDUFV2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDUFV2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDUFV2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDUFV2 em células tumorais com expressão de NDUFV2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.