NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404639

概要

NDUFS3は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）を構成する、核ゲノムにコードされた必須サブユニットをコードしており、NADHからユビキノンへの電子伝達を担うとともに、酸化的リン酸化の効率維持に寄与します。ミトコンドリア内膜上の複合体における中核的な構造要素として、NDUFS3は複合体Iの組み立てと安定性に関与し、ミトコンドリア膜電位、ATP産生、ならびに活性酸素種（ROS）恒常性に影響を与えます。NDUFS3を含む複合体Iサブユニットの異常は、ミトコンドリア機能障害と関連し、高エネルギー需要の組織や、より広範な細胞ストレス応答に影響し得ます。そのためNDUFS3は、疾患関連の細胞モデルにおけるバイオエナジェティクス、ミトコンドリア品質管理、代謝リプログラミングの研究において重要です。

NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNDUFS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NDUFS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NDUFS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NDUFS3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NDUFS3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NDUFS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NDUFS3の機能に不可欠なNDUFS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NDUFS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNDUFS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NDUFS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NDUFS3 HDRプラスミド（h）および NDUFS3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNDUFS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNDUFS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。