NDST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404078

Übersicht

NDST1 (N-Deacetylase/N-Sulfotransferase 1) ist ein zentrales, im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das während der Biosynthese von Heparansulfat-Proteoglykanen die N‑Sulfatierung initiiert und fortführt und dadurch die Sulfatierungsmuster prägt, die die Bindungsspezifität von Liganden bestimmen. Durch die Kontrolle der Heparansulfat-Struktur moduliert NDST1 die Organisation der extrazellulären Matrix sowie die Funktion von Zelloberflächen-Korezeptoren, die Signalwege von Wachstumsfaktoren und Morphogenen beeinflussen, darunter FGF-, WNT-, Hedgehog- und VEGF-Achsen. Diese sulfatierungsabhängigen Interaktionen wirken sich auf Programme der Zelladhäsion, Migration und Differenzierung aus, die für Entwicklung und Gewebehomöostase zentral sind. Eine fehlregulierte NDST1-Aktivität und eine veränderte Heparansulfat-Zusammensetzung wurden mit vielfältigen pathophysiologischen Prozessen in Verbindung gebracht, darunter Umbau des Tumormikromilieus, fibroseassoziierte Signalgebung und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen, was NDST1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der durch die Glykokalyx vermittelten Signalübertragung macht.

Das NDST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NDST1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NDST1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NDST1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NDST1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NDST1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NDST1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NDST1-Exone abzielen, die für die NDST1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NDST1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NDST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NDST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NDST1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NDST1 HDR-Plasmid (h) und NDST1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NDST1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NDST1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.