Na+ CP type Xα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407011-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Na+ CP type Xα CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- Na+ CP type Xα CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom Na+ CP type Xα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom Na+ CP type Xα CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der SCN10A-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Na+ CP type Xα CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-407011-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Na+ CP type Xα CRISPR Activation Plasmid (h2) | sc-407011-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
SCN10A kodiert den spannungsabhängigen Natriumkanal Na+-CP Typ Xα (Nav1.8), einen tetrodotoxinresistenten Kanal, der die Initiation von Aktionspotenzialen und repetitives Feuern in erregbaren Zellen unterstützt, insbesondere in peripheren sensorischen Neuronen. Durch die Formung des Natriumeinstroms und der Dynamik der Membrandepolarisation trägt Nav1.8 zur neuronalen Erregbarkeit, zur reizinduzierten Signalübertragung sowie zu aktivitätsabhängigen Genprogrammen bei, die mit dem Umbau von Ionenkanälen verknüpft sind. Die Regulation von SCN10A greift in übergeordnete elektrophysiologische und neuroinflammatorische Signalprozesse ein, die die Nozizeption und die Funktion peripherer Nerven beeinflussen. Genetische Variation und eine dysregulierte SCN10A-Expression wurden mit veränderten Schmerzphänotypen und Merkmalen der kardialen Elektrophysiologie in Verbindung gebracht, was seine Nutzung in mechanistischen Studien zu Erregbarkeitsstörungen unterstützt.
Na+ CP type Xα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCN10A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
Na+ CP type Xα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCN10A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCN10A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Na+ CP type Xα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCN10A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Na+ CP type Xα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Na+ CP type Xα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCN10A-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.