Na⁺ CP type Xα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407011-ACT

SCN10A codifica o canal de sódio dependente de voltagem Na+ CP tipo Xα (Nav1.8), um canal resistente à tetrodotoxina que sustenta o início do potencial de ação e a descarga repetitiva em células excitáveis, particularmente em neurónios sensoriais periféricos. Ao moldar o influxo de sódio e a dinâmica de despolarização da membrana, o Nav1.8 contribui para a excitabilidade neuronal, a sinalização evocada por estímulos e programas génicos dependentes de atividade ligados à remodelação de canais iónicos. A regulação de SCN10A cruza-se com processos mais amplos de eletrofisiologia e de sinalização neuroinflamatória que influenciam a nociceção e a função dos nervos periféricos. Variações genéticas e expressão desregulada de SCN10A têm sido associadas a fenótipos de dor alterados e a características da eletrofisiologia cardíaca, sustentando a sua utilização em estudos mecanísticos de distúrbios relacionados com a excitabilidade.

Na+ CP type Xα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCN10A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Na+ CP type Xα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCN10A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCN10A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Na+ CP type Xα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCN10A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Na+ CP type Xα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Na+ CP type Xα em células tumorais com expressão de SCN10A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.