NAPRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406144

概要

NAPRT（ニコチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ）は、NAD 生合成における主要酵素であり、ニコチン酸をニコチン酸モノヌクレオチドへ変換する反応を触媒して、Preiss–Handler 経路を支えます。細胞内の NAD プールを維持することで、NAPRT はレドックス恒常性や、代謝・ストレス応答・DNA 修復に関与する NAD 依存性酵素の活性に影響を与えます。NAPRT の発現または活性の変化は、がんや炎症性疾患を含む複数の疾患状況で見られる代謝リプログラミングや NAD サルベージ経路への依存性と関連づけられています。そのため、NAPRT はエネルギー代謝、ミトコンドリア機能、ならびに遺伝毒性ストレスや酸化ストレスに対する細胞の耐性を制御する経路の研究で、しばしば注目されています。

NAPRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNAPRT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NAPRT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NAPRTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NAPRTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NAPRTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NAPRT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NAPRTの機能に不可欠なNAPRTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NAPRTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NAPRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNAPRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NAPRT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NAPRT HDRプラスミド（h）および NAPRT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNAPRTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNAPRT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。