NAPRT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406144

Übersicht

NAPRT (Nikotinat-Phosphoribosyltransferase) ist ein Schlüsselenzym der NAD-Biosynthese, das die Umwandlung von Nicotinsäure zu Nicotinsäure-Mononukleotid katalysiert und damit den Preiss-Handler-Stoffwechselweg unterstützt. Durch die Aufrechterhaltung zellulärer NAD-Pools beeinflusst NAPRT die Redox-Homöostase sowie die Aktivität NAD-abhängiger Enzyme, die an Stoffwechselprozessen, Stressantworten und der DNA-Reparatur beteiligt sind. Eine veränderte Expression oder Aktivität von NAPRT wurde mit metabolischer Umprogrammierung und Abhängigkeiten von NAD-Salvage-Mechanismen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebs und entzündliche Erkrankungen. Daher wird NAPRT häufig in Signal- und Stoffwechselwegen untersucht, die den Energiestoffwechsel, die Mitochondrienfunktion und die zelluläre Widerstandsfähigkeit gegenüber genotoxischem oder oxidativem Stress steuern.

Das NAPRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NAPRT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NAPRT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NAPRT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NAPRT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NAPRT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NAPRT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NAPRT-Exone abzielen, die für die NAPRT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NAPRT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NAPRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NAPRT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NAPRT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NAPRT HDR-Plasmid (h) und NAPRT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NAPRT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NAPRT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.