Nanos3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407364

概要

NANOS3は、RNA結合タンパク質であるNanos3をコードしており、ヒトの始原生殖細胞の生存と維持に必要な、保存性の高い転写後制御因子である。Nanos3は翻訳を抑制し、特定mRNAの選択的分解（ターンオーバー）を促進することで生殖細胞系列の規定プログラムに機能し、初期発生における細胞運命決定、増殖、アポトーシスを制御する経路と統合的に作用する。NANOS3活性の制御異常は、生殖細胞発生の障害や不妊に関連する表現型と関連づけられており、また一部の生殖細胞由来腫瘍では発現変化が報告されている。生殖細胞系列の決定因子として、NANOS3はRNA制御ネットワークおよび系譜（ライン）特異的な転写プログラムを解析する上で有用な結節点となる。

Nanos3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNANOS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NANOS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NANOS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nanos3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nanos3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NANOS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nanos3の機能に不可欠なNANOS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NANOS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nanos3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNanos3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NANOS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nanos3 HDRプラスミド（h）および Nanos3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNANOS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNANOS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。