Nanog Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418033-LAC

NANOG codifica il fattore di trascrizione homeobox Nanog, un regolatore centrale della pluripotenza che mantiene l’autorinnovamento e sopprime l’impegno verso specifiche linee di differenziamento negli stati delle cellule staminali umane. Nanog coopera con reti trascrizionali fondamentali che coinvolgono OCT4/POU5F1 e SOX2 e interagisce con vie di segnalazione quali TGF-β/SMAD, WNT/β-catenina e FGF/ERK per bilanciare programmi di pluripotenza e di differenziamento. L’espressione deregolata di NANOG è spesso utilizzata come indicatore molecolare di “stemness” e plasticità cellulare, e i circuiti trascrizionali alterati guidati da NANOG sono studiati nei difetti dello sviluppo e nella biologia tumorale, dove fenotipi simili a cellule staminali sono implicati nella progressione e nei meccanismi di resistenza. In quanto proteina nucleare legante il DNA, Nanog influenza l’accessibilità della cromatina e l’attività degli enhancer trascrizionali, rendendola un nodo chiave per studi meccanicistici delle reti di regolazione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale Nanog (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NANOG in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nanog (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NANOG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nanog. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NANOG e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.