NALP7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403262-ACT

NLRP7 codifica a NALP7, um recetor citosólico do tipo NOD que participa na deteção imunitária inata e na regulação da sinalização associada ao inflamassoma. Por meio de interações que influenciam a montagem do inflamassoma, a NALP7 pode modular a atividade a jusante da caspase-1 e o processamento de citocinas da família da IL-1, ligando-a a vias inflamatórias e de resposta ao stress. A expressão e as variações de sequência de NLRP7 têm sido associadas à patobiologia reprodutiva e placentária, incluindo mola hidatiforme recorrente e outras perturbações relacionadas do desenvolvimento embrionário precoce. Estas características tornam o NLRP7 um alvo útil para analisar a regulação da imunidade inata na biologia do trofoblasto, em linhagens do tipo macrófago e noutros contextos em que o ajuste fino do inflamassoma influencia a homeostase celular.

NALP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLRP7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NALP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLRP7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLRP7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NALP7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLRP7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NALP7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NALP7 em células tumorais com expressão de NLRP7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.