Plásmido Doble Nickase (h) N-SMase: sc-405568-NIC

El SMPD2 humano codifica la esfingomielinasa neutra (N‑SMase), una enzima asociada a la membrana que hidroliza la esfingomielina para generar ceramida y fosfocolina, modelando así la composición de los esfingolípidos y las salidas de señalización. La actividad de la N‑SMase contribuye a la regulación, dependiente de ceramida, de las respuestas al estrés, la dinámica de los microdominios de membrana, el tráfico endomembranoso y la interconexión con programas de señalización apoptótica e inflamatoria. Al controlar el flujo de ceramida, SMPD2 influye en vías vinculadas al estrés del RE y la homeostasis lipídica, incluidos efectos aguas abajo sobre la señalización MAPK/NF‑κB y el transporte vesicular. La desregulación del metabolismo de los esfingolípidos que involucra a SMPD2 se ha estudiado en contextos como la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la adaptación al estrés asociada al cáncer, lo que respalda su relevancia como diana de investigación en biología de enfermedades.

N-SMase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMPD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMPD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMPD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMPD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.