N-SMase Plasmide Double Nickase (h): sc-405568-NIC

L’SMPD2 umano codifica la sfingomielinasi neutra (N-SMase), un enzima associato alla membrana che idrolizza la sfingomielina generando ceramide e fosfocolina, contribuendo così a modellare la composizione degli sfingolipidi e gli output di segnalazione. L’attività della N-SMase partecipa alla regolazione, dipendente dalla ceramide, delle risposte allo stress, della dinamica dei microdomini di membrana, del traffico endomembranoso e del crosstalk con programmi di segnalazione apoptotici e infiammatori. Attraverso il controllo del flusso di ceramide, SMPD2 influenza vie collegate allo stress del RE e all’omeostasi lipidica, inclusi effetti a valle sulla segnalazione MAPK/NF-κB e sul trasporto vescicolare. Un metabolismo degli sfingolipidi deregolato che coinvolge SMPD2 è stato studiato in contesti quali neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e adattamento allo stress associato al cancro, a sostegno della sua rilevanza come bersaglio di ricerca nella biologia delle malattie.

N-SMase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMPD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMPD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMPD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMPD2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.