N-Ras CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421960

概要

マウスのNrasは、膜関連性の小型GTPアーゼであるN-Rasをコードしており、GDP結合状態とGTP結合状態の間を循環しながら、受容体型チロシンキナーゼなどの上流シグナルを伝達します。活性化したN-Rasは、RAF–MEK–ERK（MAPK）系やPI3K–AKT系を含む主要なRasエフェクター経路を介して作用し、増殖、分化、細胞骨格ダイナミクス、生存を協調的に制御します。N-Ras活性の厳密な制御は、正常な造血および発生過程のシグナル伝達に不可欠であり、Ras経路のフラックスの攪乱は、がん化（腫瘍性形質転換）や炎症性微小環境応答に広く関与します。そのためNrasは、マウスの細胞モデルおよび疾患モデルにおいて、Ras駆動型ネットワークの再配線や経路間クロストークを解析するための重要な結節点となります。

N-Ras CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNras遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nras内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nrasのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、N-Rasタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、N-Rasシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nras欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• N-Rasの機能に不可欠なNrasエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nrasゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• N-Ras CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびN-Ras CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nras遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  N-Ras HDRプラスミド（m）および N-Ras HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNrasホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNras標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。