N-Myc CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421918

概要

MycnはN-Myc転写因子をコードしており、これはE-boxモチーフに結合して、細胞周期の進行、生合成代謝、リボソーム生合成、ならびに胚発生における系譜決定を制御する遺伝子プログラムを調節するMYCファミリーの一員です。マウス系では、N-Mycは神経系および間葉系の前駆細胞の増殖・拡大に不可欠であり、PI3K–AKT–mTORやMAPKなどの経路からのシグナル入力を統合して、増殖と分化を調整します。MYCN活性の制御破綻は、がん化、クロマチン状態の変化、複製ストレスと強く関連しており、腫瘍形成研究および発生生物学における中心的な結節点となっています。N-Myc依存性ネットワークはDNA損傷応答やアポトーシスとも交差しており、増殖制御や細胞運命決定の機構解明を可能にします。

N-Myc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMycn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mycn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mycnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、N-Mycタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、N-Mycシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mycn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• N-Mycの機能に不可欠なMycnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mycnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• N-Myc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびN-Myc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mycn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  N-Myc HDRプラスミド（m）および N-Myc HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMycnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMycn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。