Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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N-cadherin Double Nickaseプラスミド (m): sc-419593-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- N-cadherin Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- N-cadherinダブルニカースプラスミド（m）およびN-cadherinダブルニカースプラスミド（m2）は、Cdh2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: N-cadherin 抗体 (D-4): sc-8424
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
N-cadherin Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419593-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
N-cadherin Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-419593-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのCdh2は、カルシウム依存性の接着受容体であるN-カドヘリンをコードしており、同種結合（ホモフィリック）による細胞—細胞間接着を仲介するとともに、カテニン複合体を介してアクチン細胞骨格へと連結します。N-カドヘリンは、上皮間葉転換（EMT）様プログラム、集団移動、神経突起の伸長、シナプス形成に影響する接触依存的シグナル伝達を統合し、極性やメカノトランスダクションを制御するWnt/β-カテニン、Rho GTPase、Hippo/YAP/TAZなどの経路とも連関します。発生および組織リモデリングにおいて、Cdh2は形態形成、心臓および神経のパターニング、ならびにアドヘレンスジャンクションの完全性維持に不可欠です。N-カドヘリンの発現量や局在の破綻は、線維化、神経発達障害、がん細胞浸潤のモデルにおいて接着状態の変化を示すマーカーとしてしばしば用いられており、接着依存性表現型の機構研究を支持します。
N-cadherin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cdh2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cdh2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cdh2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cdh2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。