Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421802

概要

Myo7b は、アクチン依存性のモータータンパク質であるミオシンVIIBをコードしており、極性化した上皮細胞で高発現し、細胞骨格のリモデリング、頂端側（アピカル）輸送、ならびに微絨毛構造の維持に寄与します。ミオシンVIIBは、アクチンフィラメントや膜関連複合体との相互作用を介して、刷子縁の組み立てを支えるとともに、吸収機能やバリア機能に関与する膜タンパク質の配置・秩序化を促進します。MYO7B依存的なプロセスの破綻は、上皮機能障害や腸管恒常性の変化と関連するため、極性、細胞接着（ジャンクション）ダイナミクス、細胞表面の特殊化を研究するうえで有用な標的となります。マウスのMyo7bモデルは、アクチンモーター活性と上皮形態形成および組織維持を結び付ける保存的経路を解析するのに役立ちます。

Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMyo7b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Myo7b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Myo7bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin VIIBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin VIIBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Myo7b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin VIIBの機能に不可欠なMyo7bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Myo7bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin VIIB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMyosin VIIB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Myo7b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin VIIB HDRプラスミド（m）および Myosin VIIB HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMyo7bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMyo7b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。