Myosin VIIB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409183-ACT

O MYO7B humano codifica a Miosina VIIB, uma proteína motora baseada em actina que sustenta a organização do citoesqueleto e processos de transporte intracelular ligados à polaridade celular e à manutenção de domínios especializados da membrana. Como membro da família das miosinas não convencionais, está envolvido na dinâmica dos filamentos de actina, no tráfego de vesículas e em eventos de sinalização organizados por scaffolds que moldam a arquitetura epitelial. A desregulação do transporte dependente de actina e das vias de polaridade é frequentemente estudada em contextos como defeitos da função de barreira e alterações da organização tecidual relevantes para os sistemas gastrointestinal e sensorial. Assim, a modulação de MYO7B é útil para investigar como motores de actina coordenam o tráfego, os complexos de adesão e a remodelação de junções em células humanas.

Myosin VIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYO7B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myosin VIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYO7B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYO7B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myosin VIIB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYO7B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myosin VIIB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myosin VIIB em células tumorais com expressão de MYO7B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.