Myosin If Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403977-ACT

MYO1F codifica a miosina If, uma proteína motora dependente de actina enriquecida em células hematopoéticas, que sustenta a dinâmica de membrana, a remodelação do actina cortical e a geração de força durante a adesão e a migração. A miosina If contribui para o tráfego vesicular, a formação do copo fagocítico e a organização do citoesqueleto associada a integrinas, ligando a motilidade impulsionada por ATP à polaridade e à sinalização de células imunes. Alterações na expressão ou na função de MYO1F têm sido associadas à motilidade leucocitária desregulada e a respostas inflamatórias, tornando-o relevante para estudos de homeostase imune e de mecanismos de doenças imunomediadas. Sua atividade faz interface com vias reguladoras de actina que coordenam endocitose, quimiotaxia e a arquitetura da sinapse imune.

Myosin If O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYO1F sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myosin If O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYO1F em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYO1F, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myosin If. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYO1F nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myosin If no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myosin If em células tumorais com expressão de MYO1F silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.