Myosin Id CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403425-ACT

Das humane Gen **MYO1D** kodiert **Myosin Id**, einen aktinbasierten, membranassoziierten Motor, der an der Kopplung des kortikalen Aktinzytoskeletts an intrazelluläre Membranen beteiligt ist. Myosin Id unterstützt Prozesse wie Membrantransport, endozytisches Recycling sowie die Organisation von Zellpolarität und -form und verknüpft dabei den Umbau des Zytoskeletts mit der räumlichen Kontrolle von Signalprozessen an der Plasmamembran. Über diese Funktionen kann MYO1D Signalwege beeinflussen, die von gerichtetem Vesikeltransport und einer zytoskelettabhängigen Verteilung von Rezeptoren abhängen. Eine Fehlregulation der Aktin–Membran-Dynamik und von Polaritätsprogrammen ist für krankheitsassoziierte Phänotypen relevant, darunter veränderte Zellmigration und epitheliale Organisation, was MYO1D zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur zellulären Homöostase macht.

Myosin Id Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYO1D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Myosin Id Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYO1D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYO1D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Myosin Id-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYO1D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Myosin Id-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Myosin Id-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYO1D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.