Myosin Ib CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403530

概要

MYO1BはミオシンIbをコードしており、ミオシンIbはアクチン依存性で膜に結合するモータータンパク質として、細胞皮質の張力形成や細胞膜の動的な再構築に寄与します。ミオシンIbは、ホスホイノシチドに富む膜に力の発生を結び付けることで、エンドサイトーシス輸送、膜ラッフリング、アクチンネットワークの組織化に関与します。これらの機能を通じて、細胞極性、接着、移動といった、細胞骨格ダイナミクスおよび小胞輸送を制御するシグナル伝達経路と交差するプロセスに影響を及ぼします。MYO1Bの発現や活性の変化は、浸潤性の細胞挙動や上皮構造の破綻といった文脈で研究されており、アクチン皮質の疾患関連リモデリングの機構解析における重要性が示唆されています。

Myosin Ib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Ibタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Ibシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Ibの機能に不可欠なMYO1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin Ib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin Ib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin Ib HDRプラスミド（h）および Myosin Ib HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。