Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH13: sc-400602-ACT

MYH13 codifica la cadena pesada de miosina 13, una proteína motora de músculo esquelético de contracción rápida que impulsa la contracción dependiente de actina mediante el ciclo de puentes cruzados impulsado por la ATPasa dentro del sarcómero. Como parte del aparato contráctil miofibrilar, MYH13 contribuye a la especialización de las fibras musculares y regula la generación de fuerza y la velocidad de acortamiento en el músculo estriado. La expresión alterada o la desregulación de los programas de miosina sarcomérica es relevante para estudios del desarrollo muscular, el cambio de tipo de fibra y las vías de remodelación que afectan la fisiología neuromuscular. Por ello, MYH13 es una herramienta molecular útil para investigar las redes transcripcionales que gobiernan la estructura y la función del músculo esquelético, incluida la diferenciación miogénica y los módulos génicos asociados a la contractilidad.

MYH13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH13 en células tumorales con expresión de MYH13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.