MYH11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400695-ACT

MYH11 codifica a cadeia pesada 11 da miosina do músculo liso, um componente central do aparato contrátil actomiosina que sustenta a geração de força e a remodelação do citoesqueleto em células de músculo liso vascular e visceral. Por meio de interação dependente de ATP com filamentos de actina, MYH11 contribui para a contratilidade, o controle da forma celular e programas de mecanotransdução que se articulam com a sinalização de cálcio, a dinâmica de actina mediada por RhoA/ROCK e a renovação das adesões focais. Alterações na expressão ou na integridade estrutural de MYH11 podem comprometer a diferenciação do músculo liso e a função contrátil, contribuindo para instabilidade da parede vascular e prejuízo da biomecânica tecidual. MYH11 também está implicado em fusões gênicas oncogênicas em neoplasias mieloides, ressaltando sua relevância para o estudo de regulação transcricional aberrante e fenótipos específicos de linhagem.

MYH11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH11 em células tumorais com expressão de MYH11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.