musculin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403242

概要

MSCは、E-boxモチーフに結合し、他のbHLH制御因子と協調して系譜規定に関わる遺伝子発現プログラムを調節する、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子であるmusculinをコードする。Musculinは、発生や組織特異的な文脈において、細胞運命決定、分化のタイミング、転写の抑制／活性化のダイナミクスの制御に関与するとされ、下流では増殖や表現型の安定性にも影響を及ぼす。MSCの発現変化は、がんに関連した転写リプログラミングや分化状態の変化など、複数の疾患関連状況で報告されており、遺伝子制御ネットワークを研究する上で有用なノードとなる。Musculinの機能解析は、bHLH駆動回路が増殖制御や細胞アイデンティティを司る経路とどのように接続しているかを明らかにするのに役立つ。

musculin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMSC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MSC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MSCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、musculinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、musculinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MSC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• musculinの機能に不可欠なMSCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MSCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• musculin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびmusculin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MSC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  musculin HDRプラスミド（h）および musculin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMSCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMSC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。