MuRF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400797-ACT

TRIM63 codifica a MuRF1, uma ligase E3 de ubiquitina com domínio RING, específica do músculo, que promove a degradação seletiva, via proteassoma, de proteínas sarcoméricas e miofibrilares durante a remodelação do músculo esquelético e cardíaco. A MuRF1 integra a atividade do sistema ubiquitina–proteassoma com a sinalização responsiva ao estresse, incluindo programas transcricionais dependentes de FOXO e vias catabólicas que regulam a homeostase proteica e a função contrátil. A alteração da expressão de TRIM63/MuRF1 está associada a fenótipos de atrofia muscular e a processos de remodelação observados em contextos de doença crônica e desuso, sendo frequentemente estudada como um efetor molecular do desequilíbrio da proteostase. Como reguladora da estabilidade das miofibrilas, a MuRF1 oferece uma base mecanística para investigar vias que ligam estresse metabólico, inflamação e adaptação estrutural do músculo.

MuRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM63 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MuRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM63 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM63, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MuRF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM63 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MuRF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MuRF1 em células tumorais com expressão de TRIM63 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.