Mucin 6/MUC6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402946-ACT

MUC6はムチン6をコードしており、ムチン6は高分子量でO-結合型糖鎖修飾を豊富に受けた分泌性ムチンで、特に消化管を中心とする上皮表面における粘弾性をもつ粘液バリアの形成に寄与します。ゲル状の粘液マトリックスを形成し、他のムチンやトレフォイル因子と相互作用することで、MUC6は上皮の保護、潤滑、および化学的・微生物学的ストレスに対する自然免疫防御を支えます。さらに、その発現は上皮分化や炎症に伴うリモデリング過程で調節されており、MUC6の生物学は粘膜恒常性やバリア関連シグナル伝達プログラムと結び付いています。MUC6の発現異常を含むムチン発現パターンの変化は、胃やその他の粘膜組織における化生、慢性炎症、上皮の形質転換といった文脈で、しばしば研究対象となっています。

Mucin 6/MUC6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MUC6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mucin 6/MUC6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MUC6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMUC6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mucin 6/MUC6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMUC6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMucin 6/MUC6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMUC6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMucin 6/MUC6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。