Mucin 2/MUC2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400221-NIC

MUC2は、ゲル形成性の分泌型ムチンであるムチン2をコードしており、腸管粘液バリアの主要な構造要素であるとともに、上皮表面の水和状態や潤滑性を左右する重要な決定因子です。MUC2は広範なO結合型糖鎖修飾（O-グリコシル化）と重合を通じて、粘膜防御に寄与し、宿主と腸内細菌叢の空間的分離を調節し、消化管における上皮の恒常性維持を支えます。その発現と成熟過程は、杯細胞の分化プログラム、ER／ゴルジ体の分泌経路機能、ならびにムチンネットワークの組み立てと密接に関わっています。MUC2量やムチンバリア特性の破綻（ディスレギュレーション）は、炎症性腸疾患、腸炎関連炎症、そして大腸腫瘍生物学に関係する上皮ストレスの文脈で、しばしば研究対象となります。

Mucin 2/MUC2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MUC2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MUC2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MUC2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MUC2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。