Mucin 1/MUC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416876-ACT

MUC1はムチン1をコードしており、ムチン1は高度に糖鎖修飾された膜貫通型ムチンです。その細胞外ドメインは上皮バリア機能および頂端膜表面の組織化に寄与し、細胞質尾部はシグナル伝達を担います。MUC1は細胞間相互作用および細胞—細胞外基質相互作用に関与し、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達、β-カテニン依存的転写、炎症性ストレス応答を制御する経路と連携します。MUC1の発現量、局在、または糖鎖型（グライコフォーム）の変化は上皮の恒常性破綻と関連し、がん原性シグナル、浸潤、免疫調節に関わる文脈で頻繁に研究されています。膜に係留された糖タンパク質として、MUC1はムチン生物学、糖鎖修飾依存的なリガンド相互作用、ならびに細胞表面プロテオーム（surfaceome）のリモデリングを研究するためのモデルとしても広く用いられています。

Mucin 1/MUC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MUC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mucin 1/MUC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MUC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMUC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mucin 1/MUC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMUC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMucin 1/MUC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMUC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMucin 1/MUC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。