mSin3B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401638-ACT

Il gene umano **SIN3B** codifica **mSin3B**, un componente centrale del complesso corepressore della trascrizione **SIN3**, che funge da piattaforma di assemblaggio per le **istone deacetilasi** (incluse **HDAC1/2**) e per regolatori della cromatina associati, contribuendo a definire gli stati epigenetici. Attraverso interazioni con fattori di trascrizione specifici di sequenza e proteine leganti la cromatina, mSin3B modula programmi genici che governano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione, la senescenza e la trascrizione in risposta allo stress. Il rimodellamento della cromatina dipendente da SIN3B influenza la repressione trascrizionale e i percorsi di impegno di linea cellulare, collegando la sua attività a meccanismi rilevanti per la deregolazione trascrizionale oncogena e per stati alterati di proliferazione cellulare. Poiché gli assemblaggi Sin3/HDAC integrano molteplici input di segnalazione, SIN3B è spesso studiato in contesti in cui la repressione epigenetica e la stabilità delle reti trascrizionali risultano perturbate.

mSin3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIN3B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

mSin3B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIN3B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIN3B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di mSin3B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIN3B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da mSin3B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via mSin3B nelle cellule tumorali con espressione di SIN3B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.